தயாரிப்புகள்

புரத பாஸ்போரிலேஷன் பல்வேறு செல்லுலார் செயல்பாடுகளை ஒழுங்குபடுத்துகிறது மற்றும் தாவரங்களின் ஆரம்ப வளர்ச்சியில் முக்கிய பங்கு வகிக்கிறது.அரபிடோப்சிஸ் நாற்றுகளில் புரோட்டீன் பாஸ்போரிலேஷன் பற்றிய முந்தைய ஆய்வுகளை நிறைவு செய்வதற்கும் விரிவுபடுத்துவதற்கும், ரூபிஸ்கோ-குறைக்கப்பட்ட சாற்றில் உள்ள அப்படியே பாஸ்போபுரோட்டீன்களின் அசையாத மெட்டல்-அயன் அஃபினிட்டி க்ரோமடோகிராஃபி (IMAC) செறிவூட்டலுடன், சிதைக்கப்படாத நிலைமைகளின் கீழ் புரதப் பிரித்தலை இணைக்கும் மாற்று அணுகுமுறையைப் பயன்படுத்தினோம். இரு பரிமாண ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் (2-DE) மற்றும் திரவ குரோமடோகிராபி-டாண்டம் மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி (LC-MS/MS) ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்துகிறது.இன்-ஜெல் டிரிப்சின் செரிமானம் மற்றும் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட ஜெல் புள்ளிகளின் பகுப்பாய்வு 144 பாஸ்போரிலேட்டட் பெப்டைடுகள் மற்றும் எச்சங்களை அடையாளம் கண்டுள்ளது, அவற்றில் 18 பாஸ்போபெப்டைடுகள் மற்றும் 8 பாஸ்போசைட்டுகள் மட்டுமே PhosPhAt 4.0 மற்றும் P3DB அரபிடோப்சிஸ் தலியானா பாஸ்போரிலேஷன் தள தரவுத்தளங்களில் காணப்பட்டன.அடையாளம் காணப்பட்ட 82 பாஸ்போபுரோட்டீன்களில் பாதிக்கும் மேற்பட்டவை கார்போஹைட்ரேட் வளர்சிதை மாற்றம், ஒளிச்சேர்க்கை/சுவாசம் அல்லது ஆக்ஸிஜனேற்ற அழுத்த பதில் மெக்கானி எஸ்எம்எஸ் ஆகியவற்றில் ஈடுபட்டுள்ளன.2-DE மற்றும் LC-MS/MS க்கு முன் அப்படியே உள்ள பாஸ்போபுரோட்டீன்களின் செறிவூட்டல், பெப்டைட்-லெவல் செறிவூட்டலைப் பயன்படுத்தும் முறைகளுடன் ஒப்பிடும்போது பாஸ்போரிலேட்டட் த்ரோயோனைன் மற்றும் டைரோசின் எச்சங்களைக் கண்டறிவதை மேம்படுத்துவதாகத் தோன்றுகிறது.முதிர்ந்த அரபிடோப்சிஸ் இலைகளுக்கு முன்னர் பெறப்பட்ட இளம் நாற்றுகளின் முடிவுகளை ஒப்பிடுகையில், இந்த திசுக்களில் வேறுபட்ட பாஸ்போரிலேட்டட் செய்யப்பட்ட ஐந்து புரதங்கள் அடையாளம் காணப்பட்டன, இது தாவர வளர்ச்சியின் போது புரத பாஸ்போரிலேஷனின் இயக்கவியலை ஆராய்வதற்கான இந்த நுட்பத்தின் திறனை நிரூபிக்கிறது.