தயாரிப்புகள்

டிஎன்ஏ தளங்களுக்கு ஆக்ஸிஜனேற்ற சேதம் பொதுவாக ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட பியூரின்களை உருவாக்குகிறது, குறிப்பாக 7,8-டைஹைட்ரோ-8-ஆக்ஸோகுவானைன் (8-ஆக்சோஜி) மற்றும் 7,8-டைஹைட்ரோ-8-ஆக்சோடெனைன் (8-ஆக்சோஏ), முந்தையது நன்கு- அறியப்பட்ட பிறழ்வு புண்.சாதாரண தளங்களுடன் ஒப்பிடும்போது 8-oxoG ஆனது மேலும் ஆக்சிஜனேற்றத்திற்கு எளிதில் உட்பட்டது என்பதால், 8-oxoG இன் ஆக்ஸிஜனேற்ற வடிவத்திற்கு எதிரே டிஎன்ஏ தொகுப்பின் போது ஒரு தளத்தைச் செருகுவது விட்ரோவில் ஆராயப்பட்டது.ஒரு ஒற்றை 8-oxoG காயம் கொண்ட செயற்கை டெம்ப்ளேட் முதலில் வெவ்வேறு ஒரு எலக்ட்ரான் ஆக்சிஜனேற்றங்கள் அல்லது ஒற்றை ஆக்ஸிஜன் நிலைமைகளின் கீழ் சிகிச்சை அளிக்கப்பட்டது, பின்னர் Klenow துண்டு exo- (Kf exo-), கால்ஃப் தைமஸ் DNA பாலிமரேஸ் ஆல்பா (pol alpha) மூலம் வினையூக்கி ப்ரைமர் நீட்டிப்புக்கு உட்படுத்தப்பட்டது. ) அல்லது மனித டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் பீட்டா (போல் பீட்டா).முந்தைய அறிக்கைகளுக்கு இணங்க, டிஏஎம்பி மற்றும் டிசிஎம்பி ஆகியவை மூன்று டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்களுடன் 8-ஆக்ஸோஜிக்கு எதிராக தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட முறையில் செருகப்படுகின்றன.சுவாரஸ்யமாக, 8-oxoG இன் ஆக்சிஜனேற்றம் Kf எக்ஸோ-ஆல் காயத்திற்கு எதிரே dAMP மற்றும் dGMP செருகலைத் தூண்டுவது கண்டறியப்பட்டது, மாற்றியமைக்கப்பட்ட தளத்தின் தளத்தில் ஏற்படும் ப்ரைமர் நீட்டிப்பை தற்காலிகமாகத் தடுக்கிறது.மேலும், போல் ஆல்பா மற்றும் போல் பீட்டாவால் டிஎன்ஏ தொகுப்பின் போது புண் ஒரு தடுப்பை உருவாக்குகிறது.8-oxoA-மாற்றியமைக்கப்பட்ட டெம்ப்ளேட் ஒலிகோநியூக்ளியோடைடு கொண்ட பரிசோதனைகள், 8-oxoA மற்றும் 8-oxoA இன் ஆக்சிஜனேற்றப்பட்ட வடிவம் இரண்டும் Kf exo-ஆல் dTMP இன் நேரடிச் செருகலைக் காட்டுகின்றன.IrCl62 உடன் ஆக்சிஜனேற்றத்திற்கு முன்னும் பின்னும் 8-oxoG-கொண்ட ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகளின் மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரிக் பகுப்பாய்வு, முதன்மையாக 8-oxoG தளத்தின் ஆக்சிஜனேற்றத்துடன் ஒத்துப்போகிறது, இதன் விளைவாக ஒரு குவானிடினோஹைடான்டோயின் பகுதி முக்கிய தயாரிப்பாக உருவாகிறது.அபாசிக் தளங்கள் உருவாவதற்கு எந்த ஆதாரமும் கிடைக்கவில்லை.8-oxoG இன் ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட வடிவம், ஒருவேளை குவானிடினோஹைடான்டோயின், டிஎன்ஏ தொகுப்பின் போது டிஎன்டிபிகளை தவறாகப் படிக்கலாம் மற்றும் தவறாகச் செருகலாம் என்பதை இந்த முடிவுகள் நிரூபிக்கின்றன.விவோவில் அத்தகைய செயல்முறை ஏற்பட்டால், அது G-->T மற்றும் G-->C மாற்றங்களுக்கு வழிவகுக்கும் புள்ளி பிறழ்வுப் பாதிப்பைக் குறிக்கும்.இருப்பினும், 8-oxoA இன் தொடர்புடைய ஆக்ஸிஜனேற்ற வடிவம் முதன்மையாக Kf exo- உடன் DNA தொகுப்பின் போது T இன் சரியான செருகலைக் காட்டுகிறது.