தயாரிப்புகள்

கபோசியின் சர்கோமா-அசோசியேட்டட் ஹெர்பெஸ்வைரஸின் (KSHV) ORF45 புரதம் காமாஹெர்பெஸ்வைரஸ்-குறிப்பிட்ட உடனடி-ஆரம்ப டெகுமென்ட் புரதமாகும்.எங்கள் முந்தைய ஆய்வுகள் KSHV நோய்த்தொற்றின் ஆரம்ப மற்றும் பிற்பகுதியில் அதன் முக்கிய பாத்திரங்களை வெளிப்படுத்தியுள்ளன.இந்த ஆய்வில், மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடிகளின் குழுவைப் பயன்படுத்தி ORF45 இன் இன்டராக்டோமை ஆய்வு செய்தோம்.முன்னர் அடையாளம் காணப்பட்ட எக்ஸ்ட்ராசெல்லுலர் ரெகுலேட்டட் கைனேஸ் (ERK) மற்றும் p90 ரைபோசோமால் S6 கைனேஸ் (RSK) புரதங்களுடன் கூடுதலாக, ∼38 kDa மற்றும் ∼130 kDa இன் முக்கியமானவை உட்பட பல காப்பிரைப் செய்யப்பட்ட புரதங்களைக் கண்டறிந்தோம்.38-kDa புரதம் வைரஸ் ORF33 என்றும், 130-kDa புரதம் செல்லுலார் USP7 (ubiquitin-specific protease 7) என்றும் மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி வெளிப்படுத்தியது.ORF33-பைண்டிங் டொமைனை ORF45 இன் மிகவும் பாதுகாக்கப்பட்ட கார்பாக்சைல்-டெர்மினல் 19 அமினோ அமிலங்களுக்கும் (aa) மற்றும் USP7-பிணைப்பு டொமைனை ORF45 இன் மையப் பகுதியில் அறிக்கையிடப்பட்ட ஒருமித்த மையக்காட்சிக்கும் வரைபடமாக்கினோம்.இம்யூனோஃப்ளோரெசன்ஸ் ஸ்டைனிங்கைப் பயன்படுத்தி, ORF33 அல்லது USP7 உடன் ORF45 இன் கோலோகலைசேஷனை மாற்றப்பட்ட நிலை அயனிகளின் கீழ் மற்றும் KSHV- பாதிக்கப்பட்ட கலங்களில் கவனித்தோம்.மேலும், ORF33/USP7 இன் ஒரு பகுதியின் ORF45-சார்ந்த இடமாற்றம் கருவில் இருந்து சைட்டோபிளாசம் வரை இருப்பதை நாங்கள் கவனித்தோம்.ORF45 ஆனது ORF33 புரோட்டீன் திரட்சியை அதிகரிப்பதைக் கண்டறிந்தோம், ORF45 இல் உள்ள ORF33- அல்லது USP7-பைண்டிங் டொமைன் நீக்கப்பட்டால் அது ஒழிக்கப்படும்.மேலும், KSHV மரபணுவில் உள்ள ORF45 இன் பாதுகாக்கப்பட்ட கார்பாக்சைல் டெர்மினஸை நீக்குவது KSHV-பாதிக்கப்பட்ட உயிரணுக்களில் ORF33 புரதத்தின் அளவைக் கடுமையாகக் குறைத்தது மற்றும் சந்ததியின விரியன்களின் உற்பத்தியை ஒழித்தது.ஒட்டுமொத்தமாக, எங்கள் முடிவுகள் ORF45 இன்டராக்டோமின் புதிய கூறுகளை வெளிப்படுத்துவது மட்டுமல்லாமல், இந்த புரதங்களுக்கிடையேயான தொடர்புகள் KSHV லைடிக் பிரதியெடுப்பிற்கு முக்கியமானவை என்பதை நிரூபிக்கிறது. கபோசியின் சர்கோமா-தொடர்புடைய ஹெர்பெஸ்வைரஸ் (KSHV) பல மனித புற்றுநோய்களுக்கு காரணமான முகவராகும்.KSHV ORF45 என்பது மல்டிஃபங்க்ஸ்னல் புரோட்டீன் ஆகும், இது KSHV லைடிக் ரெப்ளிகேஷனுக்குத் தேவைப்படுகிறது, ஆனால் ORF45 அதன் முக்கியமான செயல்பாடுகளைச் செய்யும் சரியான வழிமுறைகள் தெளிவாக இல்லை.எங்களின் முந்தைய ஆய்வுகள் செல்களில் உள்ள அனைத்து ORF45 pr ஓட்டீன்களும் உயர் மூலக்கூறு-எடை வளாகங்களில் இருப்பதை வெளிப்படுத்தியது.எனவே ORF45 இன் இன்டராக்டோமை வகைப்படுத்த முயன்று, லைடிக் நகலெடுப்பின் போது அதன் பாத்திரங்களைப் பற்றிய நுண்ணறிவுகளை வழங்கினோம்.மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடிகளின் குழுவைப் பயன்படுத்தி, KSHV- பாதிக்கப்பட்ட செல்களில் ORF45 இன்டராக்டோமை ஆய்வு செய்தோம்.ORF45 இன் இரண்டு புதிய பிணைப்பு கூட்டாளர்களை நாங்கள் அடையாளம் கண்டுள்ளோம்: வைரஸ் புரதம் ORF33 மற்றும் செல்லுலார் ubiquitin-specific protease 7 (USP7).KSHV வைரஸ் துகள்களின் திறமையான உற்பத்திக்கு ORF45 மற்றும் ORF33 க்கு இடையேயான தொடர்பு முக்கியமானது என்பதை நாங்கள் மேலும் நிரூபிக்கிறோம், இந்த இடைவினையின் இலக்கு குறுக்கீடு KSHV லைடிக் நகலெடுப்பைத் தடுப்பதற்கான ஒரு புதிய உத்தியைக் குறிக்கலாம் என்று பரிந்துரைக்கிறது.