தயாரிப்புகள்

புரோட்டீம் அளவிலான பாஸ்போரிலேஷன் நிகழ்வுகளின் பகுப்பாய்வு இன்னும் ஒரு பெரிய பகுப்பாய்வு சவாலாக உள்ளது, ஏனெனில் புரத பாஸ்போரிலேஷன் நெட்வொர்க்குகளின் மகத்தான சிக்கலானது.இந்த வேலையில், லைஸ்-என், லைஸ்-சி மற்றும் டிரிப்சின் ஆகியவற்றின் நிரப்புத்தன்மையை பாஸ்போபுரோட்டீமின் உலகளாவிய பகுப்பாய்விற்கு பங்களிக்கும் திறன் குறித்து மதிப்பீடு செய்கிறோம்.N-டெர்மினலி அசிடைலேட்டட், பாஸ்போரிலேட்டட் மற்றும் மாற்றப்படாத பெப்டைட்களை திறமையாக பிரிக்க குறைந்த pH வலுவான கேஷன் பரிமாற்றத்தின் சுத்திகரிக்கப்பட்ட பதிப்பு பயன்படுத்தப்பட்டது.மூன்று நொதிகளின் கலவையைப் பயன்படுத்தி 1 மில்லிகிராம் புரதத்திலிருந்து <1% தவறான கண்டுபிடிப்பு விகிதத்துடன் மொத்தம் 5036 தேவையற்ற பாஸ்போபெப்டைடுகள் அடையாளம் காணப்பட்டன.வெவ்வேறு புரோட்டீஸ்களுடன் உருவாக்கப்படும் பாஸ்போபெப்டைட் தரவுத் தொகுப்புகளுக்கு இடையே உள்ள ஒன்றுடன் ஒன்று சிறியது என்பதை எங்கள் தரவு வெளிப்படுத்தியது, அதேசமயம் இதேபோல் உருவாக்கப்பட்ட இரண்டு டிரிப்டிக் தரவுத் தொகுப்புகளுக்கு இடையிலான ஒன்றுடன் ஒன்று குறைந்தது 4 மடங்கு அதிகமாக இருப்பது கண்டறியப்பட்டது.இந்த வழியில், Lys-N மற்றும் ட்ரிப்சினின் இணையான பயன்பாடு டிரிப்சினுடன் மட்டும் ஒப்பிடும்போது கண்டறியப்பட்ட பாஸ்போபெப்டைடுகளின் எண்ணிக்கையில் 72% அதிகரிப்புக்கு வழிவகுத்தது, அதேசமயம் டிரிப்சின் பிரதி பரிசோதனை 25% அதிகரிப்புக்கு வழிவகுத்தது.எனவே, டிரிப்சின் மற்றும் லைஸ்-என் தரவுகளில் மட்டுமே கவனம் செலுத்தும் போது, ​​4671 தேவையற்ற பாஸ்போபெப்டைடுகளை நாங்கள் கண்டறிந்தோம்.கண்டறியப்பட்ட தளங்களின் மேலும் பகுப்பாய்வு, லைஸ்-என் மற்றும் டிரிப்சின் தரவுத் தொகுப்புகள் கணிசமாக வேறுபட்ட பாஸ்போரிலேஷன் மையக்கருத்துகளில் செறிவூட்டப்பட்டிருப்பதைக் காட்டியது, மேலும் பாஸ்போபுரோட்டீம் பகுப்பாய்வுகளில் மல்டிபுரோட்டீஸ் அணுகுமுறைகள் மிகவும் மதிப்புமிக்கவை என்பதை மேலும் நிரூபிக்கிறது.