தயாரிப்புகள்

டிரிஸ் அசிடேட் உப்பு TAE (Tris-acetate-EDTA) தாங்கல் தயாரிப்பில் அடிக்கடி பயன்படுத்தப்படுகிறது, இது இயங்கும் இடையகமாகவும் அகரோஸ் ஜெல்களிலும் பயன்படுத்தப்படுகிறது.டிரிஸ் அசிடேட்-ஈடிடிஏ இடையகமானது டிஎன்ஏ அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸுக்குப் பயன்படுத்தப்படுகிறது, ஆனால் இது ஆர்என்ஏ அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸுக்குப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏ மற்ற பஃபர்களை விட TAE இல் வேகமாக இயங்கும் மற்றும் நீட்டிக்கப்பட்ட எலக்ட்ரோபோரேசிஸின் போது தீர்ந்துவிடும்.நீட்டிக்கப்பட்ட எலக்ட்ரோபோரேசிஸின் போது தாங்கல் சுழற்சி அல்லது இடையக மாற்றுதல் குறைந்த தாங்கல் திறனை சரிசெய்ய முடியும்.கரைசலில் டிஎன்ஏவின் இயக்கத்தை ஆய்வு செய்ய பல்வேறு செறிவுகளில் பயன்படுத்தப்படலாம்.TBE பஃபரில் உள்ள போரேட் (Tris-Borate-EDTA Buffer, 10X Powder Pack, sc-296651) பல நொதிகளுக்கு ஒரு வலுவான தடுப்பானாக இருப்பதால், டிஎன்ஏ மாதிரிக்கான நொதிப் பயன்பாடுகளைப் பார்க்கும்போது TAE தாங்கல் பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.டிரிஸ் அசிடேட் உப்பு, ஃபயர்ஃபிளை லூசிஃபெரேஸ் உடன் ATP மதிப்பீடுகளில் அதிக உணர்திறன் கொண்ட ஒரு இடையகமாகும்.

பயன்கள்: டிஎன்ஏ அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸுக்கு TAE இயங்கும் தாங்கல் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் இடையகமாகும், மேலும் இது நேட்டிவ் ஆர்என்ஏ அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸுக்கும் பயன்படுத்தப்படுகிறது.டபுள்-ஸ்ட்ராண்ட் டிஎன்ஏ மற்ற பஃபர்களை விட TAE இல் வேகமாக நகரும், ஆனால் நீடித்த எலக்ட்ரோபோரேசிஸின் போது தாங்கல் அயனிகளின் குறைவு காரணமாக நீந்துவதில் தோல்வியடைகிறது.நீடித்த எலக்ட்ரோபோரேசிஸின் போது இடையக சைக்கிள் ஓட்டுதல் அல்லது இடையக பரிமாற்றம் குறைந்த தாங்கல் திறனை ஈடுசெய்யும்.2 40 mM டிரிஸ் அசிடேட் மற்றும் 1 mM EDTA, pH 8.3 ஆகியவற்றைக் கொண்ட 1 mMTAE இடையகத்தைப் பெற செறிவூட்டப்பட்ட TAE இடையகத்தை நீர்த்துப்போகச் செய்யவும்.1 mMTAE தாங்கல் அகரோஸ் ஜெல்களிலும் இயங்கும் இடையகத்திலும் பயன்படுத்தப்படலாம்.அதிகபட்ச தெளிவுத்திறனுக்காக, பயன்படுத்தப்பட்ட மின்னழுத்தம் 5V/cm (அலகு மின்முனைகளுக்கு இடையிலான தூரம்) விட குறைவாக இருக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

பயன்பாடு: TAE இயங்கும் தாங்கல் என்பது கெமிக்கல்புக் ஜெல்லில் டிஎன்ஏ அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸுக்கு பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் இடையகமாகும், மேலும் இது ஆர்என்ஏ அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் நீக்கம் செய்யப் பயன்படுகிறது.டபுள்-ஸ்ட்ராண்ட் டிஎன்ஏ மற்ற பஃபர்களை விட TAE இல் வேகமாக நகரும், ஆனால் நீடித்த எலக்ட்ரோபோரேசிஸின் போது தாங்கல் அயனிகளின் குறைவு காரணமாக நீந்துவதில் தோல்வியடைகிறது.நீடித்த எலக்ட்ரோபோரேசிஸின் போது இடையக சைக்கிள் ஓட்டுதல் அல்லது இடையக பரிமாற்றம் குறைந்த தாங்கல் திறனை ஈடுசெய்யும்.செறிவூட்டப்பட்ட TAE இடையகமானது 40 mM டிரிஸ் அசிடேட் மற்றும் 1 mM EDTA, pH 8.3 ஆகியவற்றைக் கொண்ட 1 mMTAE இடையகத்தைப் பெற நீர்த்தப்பட்டது.1 mMTAE தாங்கல் அகரோஸ் ஜெல்களிலும் இயங்கும் இடையகத்திலும் பயன்படுத்தப்படலாம்.அதிகபட்ச தெளிவுத்திறனுக்காக, பயன்படுத்தப்பட்ட மின்னழுத்தம் 5V/cm (அலகு மின்முனைகளுக்கு இடையிலான தூரம்) விட குறைவாக இருக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

பயன்கள்: ஃபயர்ஃபிளை லூசிஃபெரேஸுடன் ஏடிபியைக் கண்டறிவதில், இந்தத் தயாரிப்பு மிகவும் உணர்திறன் வாய்ந்த இடையகமாகும்;குளுட்டமேட் பிணைப்பு கண்டறிதல்.

ஏற்பி அல்லாத பொருட்களுடன் [3H]l-குளுடாமிக் அமிலத்தை இடமாற்றம் செய்யக்கூடிய பிணைப்பு.

[3H] எல்-குளுடாமிக் அமிலம் மைக்ரோஃபியூஜ் குழாய்கள் மற்றும் கண்ணாடியுடன் பிணைப்பது நான்கு இடையகங்களில் ஆராயப்பட்டது.இந்த பொருட்களுடன் பின்னணி பிணைப்பு மிகக் குறைவு, ஆனால் Tris-HCl மற்றும் Tris-citrate இடையகங்களில் மையவிலக்கு அல்லது உறிஞ்சுதல் மூலம் அதிகரிக்கப்பட்டது.இந்த பிணைப்பு மிகவும் குறைவாக இருந்தது அல்லது அதற்குப் பதிலாக HEPES-KOH அல்லது Tris-acetate buffer பயன்படுத்தப்பட்டது.[3H] மைக்ரோஃபியூஜ் குழாய்களுடன் L-குளுட்டமேட் பிணைப்பு L-ஆல் தடுக்கப்பட்டது ஆனால் குளுட்டமேட் மற்றும் அஸ்பார்டேட்டின் D-ஐசோமர்கள் அல்ல.DL-2-amino-7-phosphonoheptanoic அமிலமும் பிணைப்பைத் தடுக்கவில்லை.குறைந்த முதல் மிதமான தடுப்பைக் காட்டிய பிற சேர்மங்கள்: N-methyl-D-aspartate, quisqualate, L-glutamic acid diethyl ester, N-methyl-L-aspartate, kainate மற்றும் 2-amino-4 -phosphonobutyrate.சிதைக்கப்பட்ட எலி மூளை சவ்வுகளால் பிணைப்பு தடுக்கப்பட்டது.டிரிஸ்-அசிடேட் பஃப்பரில் பிணைப்பு செய்யப்படும்போது, ​​மீண்டும் மீண்டும் உறைந்த-கரைக்கப்பட்ட சவ்வு தயாரிப்புடன் புரதம் சார்ந்த [3H]குளுட்டமேட் பிணைப்பு பெறப்பட்டது.குளுட்டமேட் பின் டிங் மதிப்பீட்டில் டிரிஸ்-அசிடேட் அல்லது HEPES -KOH இடையகத்தைப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.டிரிஸ்-எச்.சி.எல் அல்லது டிரிஸ்-சிட்ரேட் பஃபர் பயன்படுத்தப்பட்டால், மைக்ரோஃபியூஜ் குழாய்கள் அல்லது கண்ணாடி இழை வடிப்பான்களுடன் பிணைப்பை சரிசெய்ய பொருத்தமான கட்டுப்பாட்டு பரிசோதனை செய்யப்பட வேண்டும்.