தயாரிப்புகள்

X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside என்பதன் சுருக்கமாக BCIG) என்பது ஒரு மாற்று இண்டோலுடன் இணைக்கப்பட்ட கேலக்டோஸைக் கொண்ட ஒரு கரிம சேர்மமாகும்.1964 ஆம் ஆண்டில் ஜெரோம் ஹார்விட்ஸ் மற்றும் கூட்டுப்பணியாளர்களால் இச்சேர்மம் ஒருங்கிணைக்கப்பட்டது. முறையான இரசாயனப் பெயர் பெரும்பாலும் குறைவான துல்லியமான ஆனால் ப்ரோமோகுளோரோஇண்டாக்சில் கேலக்டோசைடு போன்ற குறைவான சிக்கலான சொற்றொடர்களாக சுருக்கப்பட்டது.இன்டாக்சிலில் இருந்து வரும் X ஆனது X-gal சுருக்கத்தில் Xன் மூலமாக இருக்கலாம்.X-gal பெரும்பாலும் மூலக்கூறு உயிரியலில் அதன் வழக்கமான இலக்கான β-கேலக்டோசைடு இடத்தில், β-கேலக்டோசிடேஸ் என்ற நொதியின் இருப்பை சோதிக்க பயன்படுத்தப்படுகிறது.ஹிஸ்டோ கெமிஸ்ட்ரி மற்றும் பாக்டீரியாலஜியில் இந்த நொதியின் செயல்பாட்டைக் கண்டறியவும் இது பயன்படுகிறது.என்சைம்-வினையூக்கிய நீராற்பகுப்பின் விளைவாக இண்டிகோ சாயத்தைப் போன்ற கரையாத நீல கலவைகளை வழங்கும் பல இன்டாக்சைல் கிளைகோசைடுகள் மற்றும் எஸ்டர்களில் எக்ஸ்-கேல் ஒன்றாகும்.

X-gal என்பது லாக்டோஸின் அனலாக் ஆகும், எனவே டி-லாக்டோஸில் உள்ள β-கிளைகோசிடிக் பிணைப்பை பிளவுபடுத்தும் β-கேலக்டோசிடேஸ் என்சைம் மூலம் ஹைட்ரோலைஸ் செய்யப்படலாம்.X-gal, β-கேலக்டோசிடேஸால் பிளவுபடும்போது, ​​கேலக்டோஸ் மற்றும் 5-புரோமோ- 4-குளோரோ-3-ஹைட்ராக்ஸிண்டோல் - 1. பிந்தையது தன்னிச்சையாக டைமரைஸ் செய்து 5,5'-டிப்ரோமோ-4,4'-டிக்ளோரோவாக ஆக்சிஜனேற்றப்படுகிறது. - இண்டிகோ - 2, கரையாத ஒரு தீவிர நீல நிற தயாரிப்பு.X-gal ஆனது நிறமற்றது, எனவே நீல நிற தயாரிப்பின் இருப்பு செயலில் உள்ள β-கேலக்டோசிடேஸின் இருப்புக்கான சோதனையாக பயன்படுத்தப்படலாம்.இது பாக்டீரியா β-கேலக்டோசிடேஸை (லாக்இசட் என அழைக்கப்படுகிறது) பல்வேறு பயன்பாடுகளில் ஒரு நிருபராகப் பயன்படுத்தவும் அனுமதிக்கிறது.

இரண்டு-கலப்பின பகுப்பாய்வில், β-கேலக்டோசிடேஸ் ஒன்றுடன் ஒன்று தொடர்பு கொள்ளும் புரதங்களை அடையாளம் காண ஒரு நிருபராகப் பயன்படுத்தப்படலாம்.இந்த முறையில், ஈஸ்ட் அல்லது பாக்டீரியா அமைப்பைப் பயன்படுத்தி புரோட்டீன் தொடர்புக்காக மரபணு நூலகங்கள் திரையிடப்படலாம்.திரையிடப்பட்ட புரதங்களுக்கிடையில் வெற்றிகரமான தொடர்பு இருந்தால், அது ஒரு ஊக்குவிப்பாளருடன் செயல்படுத்தும் டொமைனை பிணைக்கும்.ஊக்குவிப்பாளர் ஒரு lacZ மரபணுவுடன் இணைக்கப்பட்டிருந்தால், β-கேலக்டோசிடேஸின் உற்பத்தி, X-gal முன்னிலையில் நீல நிறமி காலனிகளை உருவாக்குகிறது, எனவே புரதங்களுக்கிடையில் ஒரு வெற்றிகரமான தொடர்பு இருப்பதைக் குறிக்கும்.இந்த நுட்பம் சுமார் 106 க்கும் குறைவான அளவிலான நூலகங்களை திரையிடுவதற்கு மட்டுப்படுத்தப்பட்டிருக்கலாம். எக்ஸ்-கேலின் வெற்றிகரமான பிளவு, இண்டோலின் ஆவியாகும் தன்மையின் காரணமாக ஒரு குறிப்பிடத்தக்க துர்நாற்றத்தை உருவாக்குகிறது.

X-gal நிறமற்றதாக இருப்பதால், செயலில் உள்ள β-கேலக்டோசிடேஸ் இருப்பதற்கான சோதனையாக நீல நிற தயாரிப்புகளின் இருப்பு பயன்படுத்தப்படலாம்.

செயலில் உள்ள நொதியின் இந்த எளிதான அடையாளம், βgalactosidase (lacZ மரபணு)க்கான மரபணுவை பல்வேறு பயன்பாடுகளில் ஒரு நிருபர் மரபணுவாகப் பயன்படுத்த அனுமதிக்கிறது.