தயாரிப்புகள்

பாலிஎதிலினைமைன் (PEI) மற்றும் γ-பாலிகுளுடாமிக் அமிலம் (γ-PGA) ஆகியவற்றைக் கொண்ட ஒரு மும்மடங்கு வளாகத்தைப் பயன்படுத்தி ஒரு புதிய சிறிய குறுக்கிடும் RNA (siRNA) விநியோக முறையை நாங்கள் உருவாக்கினோம், இது அமைதிப்படுத்தும் விளைவைக் காட்டியது மற்றும் சைட்டோடாக்சிசிட்டி இல்லை.PEI உடன் siRNA இன் பைனரி வளாகங்கள் தோராயமாக 73-102 nm துகள் அளவு மற்றும் 45-52 mV ζ-சாத்தியம்.siRNA/PEI வளாகங்களின் அமைதிப்படுத்தும் விளைவு PEI இன் அதிகரிப்புடன் அதிகரித்தது, மேலும் 16 ஐ விட அதிகமான சார்ஜ் விகிதம் கொண்ட siRNA/PEI வளாகங்கள் லூசிஃபெரேஸை (Colon26/Luc செல்கள்) தொடர்ந்து வெளிப்படுத்தும் மவுஸ் பெருங்குடல் புற்றுநோய் செல் வரிசையில் குறிப்பிடத்தக்க லூசிஃபெரேஸ் நாக் டவுனைக் காட்டியது.இருப்பினும், siRNA/Lipofectamine வளாகம் மற்றும் siRNA/PEI16 காம்ப்ளக்ஸ் ஆகியவற்றில் வலுவான சைட்டோடாக்சிசிட்டி மற்றும் இரத்தக் குவிப்பு ஆகியவை காணப்பட்டன.இந்த நச்சுத்தன்மையை சமாளிப்பதற்கான ஒரு நம்பிக்கைக்குரிய முறையாக, அயனி கலவையுடன் கூடிய கேஷனிக் வளாகங்களை ரீசார்ஜ் செய்வது.எனவே சைட்டோடாக்சிசிட்டியைக் குறைப்பதற்கும் siRNA ஐ வழங்குவதற்கும் γ-PGA ஐச் சேர்ப்பதன் மூலம் PEI (கட்டண விகிதம் 16) உடன் siRNA இன் மும்முனை வளாகங்களைத் தயாரித்தோம்.எதிர்பார்த்தபடி, γ-PGA உள்ளடக்கத்தின் அதிகரிப்புடன் மும்முனை வளாகங்களின் சைட்டோடாக்சிசிட்டி குறைந்தது, இது வளாகங்களின் ζ- ஆற்றலைக் குறைத்தது.siRNA/Lipofectamine காம்ப்ளக்ஸ் உடன் ஒப்பிடக்கூடிய வலுவான அமைதிப்படுத்தும் விளைவு, γ-PGA உள்ளிட்ட மும்முனை வளாகங்களில் அயோனிக் மேற்பரப்பு கட்டணத்துடன் கண்டறியப்பட்டது.Colon26/Luc கலங்களில் மும்முனை வளாகங்களின் உயர் ஒருங்கிணைப்பு ஃப்ளோரசன்ஸ் மைக்ரோகாபி மூலம் உறுதி செய்யப்பட்டது.வெளிப்புறமாக மாற்றப்பட்ட மரபணுவின் நாக் டவுனை அடைந்த பிறகு, ஒரு எண்டோஜெனஸ் ஹவுஸ் கீப்பிங் மரபணுவான கிளிசெரால்டிஹைட் 3-பாஸ்பேட் டீஹைட்ரோஜினேஸ் (GAPDH) ஐ நாக் டவுனில் மத்தியஸ்தம் செய்யும் வளாகத்தின் திறன் B16-F10 செல்களில் மதிப்பிடப்பட்டது.மும்முனை வளாகம் (siRNA/PEI16/γ-PGA12 வளாகம்) குறிப்பிடத்தக்க GAPDH நாக் டவுன் விளைவை வெளிப்படுத்தியது.எனவே, பயனுள்ள siRNA டெலிவரி முறையை உருவாக்கினோம்.